Tối ưu hóa điều kiện biểu hiện gen O-Methyltransferase trong vi khuẩn Escherichia coli

Abstract

Trong những năm gần đây, nghiên cứu về biểu hiện enzyme trên vi sinh vật ngày càng phát triển. Tuy nhiên, nghiên cứu về gen mã hóa enzyme O -Methyltransferase ở Việt Nam vẫn còn hạn chế, enzyme này thuộc nhóm methyltransferase, có tác dụng methyl hóa cơ chất tại vị trí 7-hydroxyl của isoflavone, flavone,... nhờ tỉnh chọn lọc hóa học cao. Đồ án tốt nghiệp này tập trung vào đề tài: "Tối ưu hóa điều kiện biểu hiện gen O-Methyltransferase trong vi khuẩn Escherichia coli." Mục tiêu là tìm ra các điều kiện tối ưu cho việc biểu hiện gen. Các phương pháp sử dụng bao gồm biến nạp, tách chiết DNA, biểu hiện protein tái tổ hợp, điện di agarose, điện di SDS-PAGE, sắc ký lòng hiệu năng cao HPLC,.... Kết quả cho thấy gen SaOMT2 được lấy từ chùng Streptomyces avermitilis mã hóa cho enzyme O-Methyltransferase, dã được biển nạp thành công vào E. coli BL21(DE3) thông qua vector pRSFDuet-1. Enzyme SaOMT2 tái tổ hợp được biểu hiện ở 25°C, nồng độ chất cảm ứng 0,1 mM IPTG, và thời gian cảm ứng 36 giờ. Điều kiện tối ưu bao gồm thời gian cảm ứng 36 giờ, môi trường biểu hiện LB, và mật độ vi khuẩn OD600 = 0,6. Khả năng chuyển hóa luteolin thành sản phẩm methyl hóa đạt 63,356%